为了直接评价Ca(OH)2处理引起的pH变化与消毒剂活性的关系，我们对体外杀菌效果进行了研究。本研究以对Ca(OH)26,7,8具有高度抗性的大肠杆菌为模型病原体，评价该处理的消毒活性。在先前的研究中，在体外实验中，大肠杆菌和沙门氏菌在暴露于Ca(OH)2溶液10分钟后，分别减少了6 log10和4 log10，这表明Ca(OH)2是一种有效的消毒剂。然而，在该报告中，由于评价是使用Ca(OH)2溶液进行的，因此尚不清楚Ca(OH)2是否在备用消毒条件下发挥其消毒作用(补充图1，图2)。此外，另一项研究报道，在牲畜粪便中添加Ca(OH)2粉末后，该粉末在6小时内对大肠杆菌和沙门氏菌失去活性。然而，该系统中也有丰富的水，而失活是由于一些其他因素，如粪便中微生物排放的二氧化碳。因此，我们开发了一种新的方法(补充图3)来评估干燥的Ca(OH)2粉末、SLBGs和CaCO3粉末在备用消毒条件下对大肠杆菌的消毒效果。新方法的细节及其验证分别在补充方法和补充图4-8中说明。在消毒剂与大肠杆菌接触开始时，所有样品的细菌丰度为4-5 log10菌落形成单位(CFU)/mL(图3a, 0 h)。接触3 h后，所有样品的丰度相似，包括对照(即不含任何消毒剂)样品(图3a, 3 h)。这些结果(图3a)清楚地表明，干燥的Ca(OH)2不能灭活大肠杆菌，表明Ca(OH)2消毒剂的活性需要水。

　　水对消毒的影响。(a)不加(对照)或不加水(干燥条件)的消毒剂(CaCO3、CA(OH)2或SLBGs)接触3小时后的大肠杆菌丰度(log10菌落形成单位，CFU)。虚线表示根据稀释比估计的检出限。(b)加了水的消毒剂(CaCO3、Ca(OH)2或SLBGs)接触3小时后的大肠杆菌丰度(湿条件)。(c)不加(对照)低pH值的Ca(OH)2(在这种Ca(OH)2中，pH值在63天的门试验中降至约9.28(图2d)，加了水(湿条件)长达3小时后的大肠杆菌丰度。(d)用消毒剂(对照、CaCO3、Ca(OH)2、(或SLBGs)在干湿条件下放置3 h。使用配备20倍物镜的荧光显微镜捕获图像。Bar, 100 μm。a、b和c中的数据代表三个独立实验的平均值和SD(误差条)。其中，a、b、c中的Alive和Dead分别表示有菌落出现的CFU范围和低于检出限(2 log10 CFU/mL)无菌落出现的CFU范围。